SFB 429 III: Untersuchungen zu Interaktionen und Regulation von Saccharose-Transportproteinen aus Solanum tuberosum (Teilprojekt B 11)

Ziel des Vorhabens ist es, die Regulation der am Saccharosetransport in Solanum tuberosum beteiligten Membranproteine aufzukl?ren. Drei verschiedene Saccharosetransporter-?hnliche Proteine mit unterschiedlichen kinetischen Eigenschaften wurden bisher in Kartoffelpflanzen beschrieben: w?hrend StSUT1 einen hochaffinen Saccharosetransporter und StSUT4 einen Transporter mit deutlich geringerer Affinit?t zum Substrat Saccharose darstellt, konnte für StSUT2 bislang keine Aktivit?t nachgewiesen werden. SUT2 weist dagegen strukturelle Besonderheiten auf und besitzt ?hnlichkeiten zu hefe-eigenen Zuckersensorproteinen. SUT2 besitzt ausgedehnte cytoplasmatische Dom?nen mit jeweils hochkonservierten Bereichen, die m?glicherweise Bindungsstellen für regulatorische Interaktionspartner darstellen. Ein Durchmustern einer Kartoffel cDNA Bank unter Verwendung des GATEWAY Klonierungssystems (Invitrogen) soll bei der Identifizierung von Interaktionspartnern helfen, die m?glicherweise die Aktivit?t oder die Bindung des SUT2 an andere Membranproteine beeinflussen k?nnen. Eine Interaktion der drei Saccharosetransportproteine SUT1, SUT2 und SUT4 untereinander ist in der Hefezelle über das Split Ubiquitin System bereits nachgewiesen worden. Die Analyse transgener Pflanzen, in denen gezielt eines der drei Proteine vermindert exprimiert wird, soll zum besseren Verst?ndnis derartiger Interaktionen untereinander in der Pflanze beitragen. Anhand von Techniken wie native Gelelektrophorese bzw. Gelfiltration sollen h?her molekulare Komplexe identifiziert werden, um eine Form der Regulation über Oligomerisierung aufzukl?ren. Andere post-translationale Regulationsmechanismen (wie z.B. Regulation über Phosphorylierung/Dephosphorylierung) sollen ebenfalls unter Verwendung der zur Verfügung stehenden spezifischen Antik?rper untersucht werden.