Selbstreinigende Synthese von Peptidthioestern zum Aufbau von Proteindom?nen auf Arrays und Beads

Die Festphasensynthese von Peptidthioestern gelingt gegenw?rtig nicht mit denselben Ausbeuten und Reinheiten wie für Peptids?uren und -amide gewohnt. Aus diesem Grund wurde bislang bei der chemischen Totalsynthese von Proteindom?nen-Arrays, die über native chemische Ligation hergestellt werden, lediglich der C-terminale Teil variiert, w?hrend die Sequenz des N-terminalen Fragments (Thioester) beibehalten werden musste. In den Vorarbeiten wurde eine leistungsf?hige Methode zur vollautomatischen Synthese von Peptidthioestern etabliert, die unter Ausnutzung eines Selbstreinigungseffekts Rohprodukte hoher Reinheit liefert. Diese k?nnen direkt ohne HPLC-Reinigung in der nativen chemischen Ligation eingesetzt werden. Die Peptidthioester werden die chemische Synthese eines SH3-Dom?nen-Arrays erm?glichen. Der Array wird zwei verschiedene, wohlcharakterisierte SH3-Dom?nen des Hefeproteoms pr?sentieren. Durch die Entwicklung eines Cystein-Scans wird beispielhaft untersucht, an welchen Stellen das für die native chemische Ligation ben?tigte Cystein eingefügt werden kann, ohne dass Kupplungsausbeuten und die Funktion der Proteindom?ne leiden. Getr?gerte Peptidthioester werden in einer On Bead Ligation verwendet. Hier wird die Abl?sung vom Syntheseharz reine Proteindom?nen liefern, da lediglich das Verknüpfungsprodukt an der Festphase gebildet wird, w?hrend Nebenprodukte und Abbruchsequenzen in L?sung verbleiben.