Molekulare Basis der Funktion von Pionier-Transkriptionsfaktoren in der Blütenentwicklung

Die Initiation neuer Entwicklungsprogramme in vielzelligen Organismen erfordert bedeutende ?nderungen in Genaktivit?t und Chromatinstruktur. Masterregulatorische Transkriptionsfaktoren k?nnen die Expression vieler Gene in der Entwicklung ver?ndern. Die molekularen Wirkmechanismen solcher Regulatoren sind noch nicht gut erforscht. Masterregulatorische Transkriptionsfaktoren kontrollieren den Beginn der Blütenentwicklung in Pflanzen, welcher einen bedeutenden Entwicklungsschritt darstellt, verbunden mit der Aktivierung geschlossener Chromatinregionen. Der Transkriptionsfaktor LEAFY (LFY) spielt eine zentrale Rolle im ?bergang vom vegetativen zum reproduktiven Wachstum und in der Differenzierung des Blütenmeristems. Unsere Strukturanalysen weisen darauf hin, dass LFY eine Oligomerisierungsdom?ne besitzt, welche es dem Faktor erm?glicht, an geschlossene Chromatinregionen zu binden. Zwei Transkriptionsfaktoren der MADS-box-Familie, APETALA1 (AP1) und SEPALLATA3 (SEP3), bilden tetramerische Komplexe und sind Schlüsselregulatoren der Blüteninitiation und -differenzierung. Wir konnten anhand genomweiter In vivo-Analysen zeigen, dass Bindung dieser Faktoren die Chromatin?ffnung an ihren Bindestellen im Genom direkt oder indirekt f?rdert. Diese Ergebnisse legen nahe, dass LFY, AP1 und SEP3 als sogenannte Pionierfaktoren agieren, welche die Expression ihrer Zielgene durch ?nderungen der Chromatinstruktur kontrollieren k?nnen. Mit Hilfe integrierter experimenteller Ans?tze in Pflanzen und in vitro werden im Rahmen dieses Projekts die molekularen Mechanismen der Funktionsweise von LFY, AP1 und SEP3 im Detail charakterisiert. Die Kombination biochemischer und krystallographischer Methoden sowie Rasterkraftmikroskopie wird die Grundlagen der Interaktionen dieser Transkriptionsfaktoren mit Nukleosomen und Nukleosom-Remodellern aufkl?ren. Anhand der Ergebnisse dieser Analysen werden Transkriptionsfaktormutanten mit ver?ndertem Proteininteraktionspotential für In vivo-Studien erzeugt. Eine Serie genomweiter Analysen, beispielsweise DNAseI-seq und MNase-seq, wird zeigen wie die Transkriptionsfaktoren in vivo mit Chromatin interagieren. Mit Hilfe von Chromatinimmunopr?zipitation gefolgt von Sequenzierung (ChIP-seq) werden genomweit die Bindestellen von LFY, SEP3 und AP1 sowie ihrer mutanten Versionen bestimmt. Diese Studien werden die molekularen Bedingungen für die Funktion dieser Transkriptionsfaktoren im Chromatinkontext kl?ren. Weiterhin werden die potentiellen Effekte der Oligomerisierung der Transkriptionsfaktoren auf die dreidimensionale Chromatinstruktur durch Chromatin Conformation Capture (3C)-basierten Methoden ermittelt. Mit Hilfe von sich erg?nzenden experimentellen Ans?tzen wird dieses Projekt Funktionsmodelle dieser zentralen Transkriptionsfaktoren erstellen. Ein wichtiges Resultat dieses Projekts ist au?erdem die Entwicklung eines experimentellen Toolkits zur Charakterisierung von eukaryotischen TF-Funktionen im Chromatinkontext.