Differentielle Funktionen der NF-Y-Untereinheiten für die Transkriptionskontrolle für oxidative Stressabwehr und Photosynthese

<p>Am CCAAT Promotormotiv bindet der heterotrimere Transkriptionsfaktor NF-Y, dessen Aufgabe in Hefen und S?ugetierzellen als Aktivator in der Aufl?sung nukleosomaler Strukturen Gene besteht, um anderen Faktoren spezifische Bindungen auf dem Promotor einzur?umen. Bisher wurden durch Genexpressionsanalysen aus den Arabidopsis-Genfami-lien für die drei Untereinheiten (mit je 10, 13 bzw. 14 Genen für NF-YA, B bzw. C) Gene ausgew?hlt, die durch oxidativen Stress, Entwicklungsabh?ngigkeit oder Redoxkontrolle induziert wurden. Es ist beabsichtigt, die funktionelle NF-Y-Komplexbildung und die NF-Y-Bindung an CCAAT-Box-Motive pflanzlicher Promotoren nachzuweisen. Beispielhaft soll diese Funktion für das stressinduzierte und CCAAT-Boxen enthaltene APX (Askorbat-Peroxidase)-Gen untersucht werden. Die NF-Y-Bindung soll mit Kernextrakten und rekombinanten Proteinen oder durch Promoter-GUS-Reporter-Assays in Kontrollpflanzen und vorhandenen NF-Y-Knock-out-Mutanten erfolgen. Für den Nachweis spezifischer Funktionen einzelner NF-Y-Peptide werden Knock-out-Mutanten ausgew?hlt, die Wirkungen der ?berexpression oder RNAi Inaktivierung einzelner NF-Y-Protein-Gene untersucht oder auch nach weiteren Interaktionspartnern des NF-Y mittels des 2-Hybrid-Systems gesucht.</p>

<p>1. K?nnen pflanzliche NF-Y Untereinheiten in vitro zu einem heterotrimeren Proteinkomplex zusammengefügt werden?</p>

<p>2. Kann der Nachweis der Bindung des NF-Y-Komplexes an CCAAT-Motive in pflanzlichen Genen mit pflanzlichen Kernextrakten oder rekombinanten Proteinen gelingen?</p>

<p>3. Kann eine unterschiedliche Affinit?t diverser NF-Y-Komplexe zu unterschiedlichen Oligomeren mit CCAAT-BOX-Motiven nachgewiesen werden?</p>
<p>4. Kann individuellen Vertretern der drei NF-Y-Untereinheiten spezielle Funktionen in der Transkriptionskontrolle einzelner Gene nachgewiesen werden?</p>

<p>5. K?nnen die Funktionen der CCAAT-Motive in stressinduzierten Genen nachgewiesen werden?</p>

<p>6. Ist die Funktion der NF-Y Trimere einer Redoxkontrolle, wie in Saugetierzellen, unterzogen?</p>

<p>7. Welche weiteren Regulatoren der Transkription interagieren mit ausgew?hlten NF-Y-Untereinheiten?</p>

<p>8. Erzeugen Deletionen einzelner Gene der NF-Y-Genfamilien signifikante Ph?notypen in Arabidopsis oder k?nnen Mutationen durch Ersatz mit anderen Vertretern der Genfamilien komplementiert werden?</p>