Development of immuno-cytologic procedures for the quantitative determination of DNA drug adducts in experimnetal cell systems and clinical samples

Ziel des Projektes ist die Entwicklung sensitiver Analysensysteme, die eine qualitative und quantitative Erfassung von strukturell definierten Addukten alkylierender Zytostatika in der DNA von Einzel-Zellen und in definierten Gen-Sequenzen erm?glichen. Exemplarisch sollen im Rahmen des Antrags die drei klinisch eingesetzten Substanzen Chlorambucil, Melphalan und Oxaliplatin untersucht werden. Die immunanalytischen Messverfahren basieren dabei auf Addukt-spezifischen monoklonalen Antik?rpern (MAK), die zun?chst mit komplexen Antigenen generiert und anschlie?end retrospektiv charakterisiert werden sollen. Die Verifizierung der Erkennungsspezifit?t der einzelnen MAK wird hier erstmals systematisch auf Massenspektrometrie / HPLC-Verfahren gestützt werden, insbesondere auf eine elementspezifische quantitative Detektion des Nukleotid-Phosphors mittels induktiv gekoppelter Plasma-Massenspektrometrie (ICP-MS). Damit wird eine nicht-radioaktive, nicht-strukturabh?ngige Alternative zu den bisherigen Analyseverfahren etabliert, mit der die immuncytologischen Assays unabh?ngig validiert werden k?nnen.